Els polimorfismes genètics LRP1 s’associen amb un risc prematur de malalties cardiovasculars en pacients amb hipercolesterolèmia familiars | Revista Espanyola de Cardiologia

Introducció

Hipercolesterolèmia famílica (FH) es caracteritza per alts nivells de colesterol de lipoproteïnes de baixa densitat en plasma. Fa un gran dipòsit de colesterol en teixits, aterosclerosi accelerada i un major risc de malaltia cardiovascular prematura (PCVD) .1 L’anomalia genètica més comuna consisteix en mutacions en el gen de lipoproteïnes de baixa densitat (LDLR) gen; La freqüència de població de la hipercolesterolèmia famílica heterocigota (HFH) és aproximadament de 1/500. Tot i que genèticament la malaltia és causada per mutacions en el gen LDLR, el fenotip clínic de FH pot variar independentment de la mutació i aquesta variabilitat se suposa que es deu a factors mediambientals i genètics.2, 3

Descobriment Les variacions en altres gens que poden modificar la susceptibilitat als esdeveniments cardiovasculars són de gran interès a causa del seu possible ús com a predictors de la malaltia.4 Els gens implicats en la captació de colesterol i l’homeòstasi són bons candidats per a aquest tipus d’estudi. La proteïna de lipoproteïnes de lipoproteïnes de baixa densitat (LRP1) és un receptor de transmembrana multilig que pertany a la família LDLR que uneix les lipoproteïnes de baixa densitat i facilita l’eliminació d’una àmplia varietat de lligands implicats en la fibrinòlisi, aterogènesi i trombogènesi.5 , 6, 7 La sobreexpressió de LRP1 a la placa ateroscleròtica s’ha demostrat en models animals i humans.8, 9 estudis han mostrat una relació entre les alteracions en l’expressió LRP1 i les malalties coronàries del cor.8, 10 sobreexpressió també s’ha descrit a la proteïna i MRNA de pacients amb Homozigus FH.11 En general, els resultats publicats indiquen que LRP1 pot ser un receptor clau en la patogènia de l’aterosclerosi.

L’objectiu d’aquest estudi va ser analitzar si hi ha polimorfismes de gens LRP1 associats Amb l’ocurrència de PCVD a FH.

Mètodes Població

L’estudi inicialment incloïa 339 casos de pacients heterocigots no relacionats de la SafeHeart Study12, 13 (“mètode s “al material complementari). Als pacients se’ls va assignar un diagnòstic de malalties cardiovasculars (CVD) si hi havia una història d’infart de miocardi, bypass coronari o angioplàstia, angina pectoris amb antihertosclerosi coronària diagnosticada angiogràfica (estenosi > 50%), traç, o un esdeveniment vascular perifèric. La malaltia cardiovascular es va considerar PCVD si l’esdeveniment es va produir abans dels 55 anys d’edat en els homes i abans de 65 anys d’edat en dones.14 Per a cada pacient, es van recollir dades sobre nivells de lípids de sang, hipertensió, diabetis mellitus i fumadors; També es van registrar dades antropomètriques. Les característiques de la població d’estudi es mostren a la taula 1; Les mutacions LDLR es van identificar en tots els pacients. Els detalls de les mutacions trobades i la seva classificació basades en l’activitat de LDLR residual (nul, deficient o indeterminat) es poden trobar a “Mètodes” i la taula 1 en el material complementari.

Taula 1. Característiques dels pacients d’estudi Amb hipercolesterolèmia famílies heterocigudes, agrupades per malalties cardiovasculars prematurs

riglicèrids, mg / dl

no PCVD (n = 262) PCVD (n = 77) p
homes 111 (42.4) 47 (35.9) .004
dones 151 (57.6) 30 (41.1)
edat, anys 45,2 ± 15,3 53.19 ± 11,3
bmi 26,3 ± 4,8 28.01 ± 5,0 .014
hipertensió 42 (16.1) 20 (26) .06
fumadors 115 (43.8) 42 (54.5) .067
Diabetis 11 (4) 3 (4) .98
Total colesterol, mg / dl 287,1 ± 62,1 281.1 ± 70,2 .512
Colesterol LDL, mg / dl 215,3 ± 58,7 209 ± 67,7 .925
hdl Colesterol, mg / dl 52,2 ± 13 51.3 ± 17,4 .24
92.5 (38-320) 94.5 (44-258) .589
apoa, mg / dl 141,1 ± 35,2 138,8 ± 32,1 .204
APOB, mg / dl 166,4 ± 43,9 159,4 ± 41 .256
efecte de La mutació de l’activitat LDLR .527
allele null 161 (61,6) 51 (66.2)
Activitat baixa 75 (28,5) 22 (28.6)
activitat indeterminada 26 (9.9) 4 (5.2)

apoa, apolipoproteïna A; APOB, Apolipoproteïna B; IMC, índex de massa corporal; HDL, lipoproteïna d’alta densitat; LDL, lipoproteïna de baixa densitat; LDLR, receptor de lipoproteïnes de baixa densitat; PCVD, malaltia cardiovascular prematura. Els resultats de
es mostren com a mitjana ± desviació estàndard, núm. (%) o medianes (rang).
Importància estadística es va fixar en p

genotips

En primer lloc, vam buscar polimorfismes al promotor LRP1 a través de polimorfismes i seqüenciació de conformació d’una sola línia de seguretat hfh. A continuació, vam analitzar l’associació genètica de 10 polimorfismes amb PCVD; L’ADN es va extreure de la sang perifèrica mitjançant el kit de purificació de l’ADN de l’ADN Wizard® (PROMEGA).

Projecció de polimorfismes en el promotor LRP1

Vegeu “Mètodes” i la taula 2 en el material complementari.

Associació genotípica Estudi

Hem seleccionat 10 polimorfismes de nucleòtids únics LRP1 (SNP) juntament amb el polimorfisme que es troba al promotor, sobre la base de la seva freqüència, referències bibliogràfiques i funcionalitat (taula 2 i la figura 1). Els polimorfismes eren genotips mitjançant un Taqman Atenció de la reacció de la cadena de cadena polimerasa ® i la discriminació al·lèlica amb un aparell de biosystem 7900 aplicat.

Taula 2. Característiques dels polimorfismes analitzats

Polimorfisme analitzat Variants genòmiques DBSNP SNP DBSNP Alleles 1 > 2 a Localització genòmica Efecte funcional Publicat MAF B MAF en aquest estudi
1 c.1-25c g rs35282763 c > g promotor Seqüència SP1 nova 0,08 0.08
2 IVS2 + 617C > t rs715948 c > t intron 2 0,32 0,31
3 c.677c > t rs1799986 c > t exon 3 ASP100SPS 0.14-0,15 0.14
4 c.1116c > t rs1800127 c > t exon 6 ala217val 0,03 0,03
5 IVS6 + 245C > g rs7968719 g > c intron 6 0,49 0,47
6 IVS19 + 144C > t rs1800176 c > t intron 19 0.30 0.30
7 c.4012c > t rs1800194 c > t exon 22 cys1182cys 0.31 0.30
8 IVS38 + 53C > t rs1800181 c > t intron 38 0.30 0.30
9 c.10249g > A rs1140648 g > A exon 61 thr3261thr 0.28 0.30
10 IVS83 + 139A > g rs1800164 g > A intron 83 0.28 0,35

DBSNP: base de dades de polimorfisme de nucleòtids individuals; MAF: freqüència menor al·lel; Identificador SNP: identificació de polimorfism de nucleòtids individuals.

Un al·lel 1 es produeix amb més freqüència.
B Freqüència d’al·lels menors al CEU Hapmap o al tauler Ceph, que es troba a la literatura. 8,15,16

Figura 1. Anàlisi de desequilibri de la vinculació entre els polimorfismes de nucleòtids únics analitzats de larp1. Blocs d’haplotips definits mitjançant el mètode de Gabriel (Haploview 4.0), amb el desequilibri de la vinculació entre parells de marcadors que es mostren com R2 (en negre R2 > 0,8). El marc a la dreta del diagrama mostra un bloc amb un fort vincle format per polimorfismes de nucleòtids individuals 6 a 9 de l’estudi.

Anàlisi funcional de la C.677C > t Polimorfisme (RS179986)

El possible efecte funcional del polimorfisme sobre el processament de l’ARNm es va analitzar mitjançant el suport bioinformàtic i l’anàlisi in vitro minigene. En aquesta prova, l’exon d’interès està clonat entre dos exons sintètics per a l’anàlisi posterior del processament de l’ARN (“mètodes” en el material complementari).

Anàlisi estadística

Es van comparar dades clíniques entre grups que utilitzen l’estudiant T Per a variables contínues, χ2 per a variables categòriques i proves no paramètriques per a variables no normalment distribuïdes (SPSS v.14.0). Les freqüències al·lels es van calcular a partir dels genotips dels temes.Per a cada polimorfisme, hem utilitzat χ2 per provar si la distribució es va reunir amb l’equilibri Hardy-Weinberg, i vam utilitzar la regressió logística multivariant per analitzar l’associació entre polimorfismes genètics LRP1 i PCVD a HFH, així com analitzar la interacció amb covariams.17, 18 Calculeu la proporció de les probabilitats (o) i els intervals de confiança del 95% (95% CI) per a cada genotip en comparació amb l’homocigot per a l’al·lel més freqüent o de referència, i hem estimat la importància mitjançant un llindar de p

el prior El poder estadístic de la mostra (77 casos i 262 controls) es va estimar en un 80% per a una prevalença de malalties del 20% i un efecte del polimorfisme sobre el risc d’un esdeveniment cardiovascular > 2 , i > 1.7 per a freqüències al·lèliques de 0,14 i 0,30, respectivament (quanto v 1.2). Hem inclòs els marcadors amb freqüències d’al·lels inferiors a causa de la seva funcionalitat (polimorfisme promotor, SNP1 i la mutació del canvi d’àcids SNP4).

Es van ajustar totes les anàlisis per a l’edat, el sexe i altres factors de risc CVD en l’estudi Població (taula 1). Les freqüències d’haplotip van ser estimades pels blocs de desequilibri (LD) definits pel mètode Gabriel, i els valors de LD i R2 entre parells de SNP es van calcular amb Haploview v. 4.2 (Figura 1).

Resultats Característiques de l’estudi Població per Presència o absència de malaltia cardiovascular prematura

Les característiques de la població d’estudi d’acord amb la presència o absència de PCVD es mostren a la Taula 1. En el moment de la matrícula en l’estudi, el 86,5% dels pacients amb HFH estaven rebent la reducció de lípids Teràpia. La malaltia arterial coronària o les malalties del cor isquèmic representaven el 93,4% dels esdeveniments. Hi va haver una predisposició més alta a PCVD en homes (P = .004), en pacients més grans (PP = .01). No hi va haver diferències significatives en la proporció de fumadors de cada grup en el moment de la inclusió en l’estudi.

Es van observar algunes diferències basades en sexe (les dades no es mostren a la taula 1): el BMI era de 28,4 (6,6 ) En les dones amb PCVD vs 26.7 (5.7) en dones sense PCVD (P = .137) i 27.7 (3.7) en homes amb PCVD en comparació amb 25,9 (3.1) en homes sense PCVD (P = .003). No hi va haver diferències significatives en la freqüència de la hipertensió i el tabaquisme entre els dos grups, tot i que la hipertensió era més freqüent en les dones (40% en PCVD vs 18,2% en no PCVD, p = .014) que els homes (16,3% vs 13,2%, P = .612) i el tabaquisme era més freqüent en els homes (82,6% en PCVD vs 58,7% en no PCVD, p = .005) que les dones (16,7% vs 33,7%, p = .085). Mentre que el percentatge d’individus amb PCVD va ser superior entre els pacients amb HFH i les mutacions més severes o més greus a LDLR, les diferències no eren significatives en aquesta mostra.

Projecció de polimorfismes al promotor LRP1

Hem detectat un Polimorfisme al promotor (Fig. 1A en material suplementari). Segons l’anàlisi de Silico, aquest polimorfisme (C.1-25C > g) crea un nou lloc de vinculació per al factor de transcripció SP1 (Fig. 1b, material complementari).

Associació de polimorfismes i haplotips amb malalties cardiovasculars prematurs en heterocigots hipercolesterolèmies famílies

La distribució de genotips conformats a l’equilibri Hardy-Weinberg en tots els polimorfismes analitzats (P > .2) . Les freqüències d’al·lels observades a la població no van diferir significativament de les dades publicades anteriorment (Taula 2). A més, els marcadors 2, 3, 5 i 6 són els SNP d’etiquetes segons el navegador de genoma Hapmap3, llançament # 2.

Els resultats de l’associació amb PCVD després d’ajustar-se per edat, sexe, IMC, IMC L’efecte de la mutació LDLR es mostra a la Taula 3. Només SNP3 (RS1799986) va mostrar una associació significativa amb PCVD en el model dominant (CT + TT vs CC, o = 1,94; 95% CL, 1.08-3.48; p = .029) . Hem obtingut resultats similars després d’augmentar la mostra a 648 pacients HFH (133 amb PCVD, i 515 sense PCVD) (Taula 3 en material suplementari) i reanalitzant les dades (o = 1,83; 95% CI, 1.16-2.88; p = .011 ).

Taula 3. Associació de polimorfismes i malalties cardiovasculars prematurs en hipercolesterolèmia famílies heterocigudes

snp ID SNP hfh (n = 339) Freqüències genotípiques por (95% ci)
1 rs35282763 cc cg gg .9
no PCVD 0.84 0,15 0,04
PCVD 0,88 0.11 0.01
2 Rs715948 cc ct tt .86
no pcvd 0.5 0.38 0.13
PCVD 0,51 0.39 0.1
3 rs1799986 cc ct tt .029
no PCVD 0,77 0.2 0,02 1.94 (1.08-3.48)
pcvd 0,64 0,36 0 ct + tt vs cc
3 * rs1799986 cc ct tt .011
no pcvd 0.76 0,22 0,02 1.83 (1.16-2.88)
PCVD 0,66 0,34 0 ct + tt vs cc
4 RS1800127 cc ct tt ns
no PCVD 0.95 0,05 0
PCVD 1 0 0
5 rs7968719 cc cg gg .79
no PCVD 0,29 0,47 0.24
PCVD 0,33 0.39 0,28
6 rs1800176 cc ct tt .096
no pcvd 0.46 0,45 0,09
PCVD 0,48 0,49 0,03
7 rs1800194 cc ct tt .07
no pcvd 0.47 0.43 0.1
PCVD 0,48 0,49 0,03
8 rs1800181 cc ct tt .07
no PCVD 0,47 0.43 0.1
PCVD 0,48 0.49 0.03
9 rs1140648 cc ct tt .075
no pcvd 0.46 0,45 0.1
PCVD 0,48 0,49 0,03
10 rs1800164 gg ag AA .72
no pcvd 0.42 0,45 0.13
PCVD 0.40 0,48 0,12

95% ci, interval de confiança del 95%; HFH, heterocigós hipercolesterolèmia familiar; Id, identificació; Ns, no significatiu; O, proporció d’probabilitats; PCVD, malaltia cardiovascular prematura; SNP, polimorfisme de nucleòtids individuals.
Tots els valors ajustats per a l’edat, el sexe, l’índex de massa corporal i el tipus de mutació del receptor de lipoproteïnes de baixa densitat; RS1799986 va mostrar un valor P de P (model dominant, genotips CT + TT vs CC).

* Resultats després d’augmentar la mostra a 515 subjectes sense PCVD i 133 amb PCVD.

La freqüència de l’al·lel per a RS179986 polimorfisme a la població amb HF era similar a la de la població de control espanyol (P = .76) i altres poblacions caucàsiques (vegeu “Mètodes” i Taula 4 en material suplementari).

Hem analitzat la interacció del polimorfisme RS179986 amb el tipus de mutació LDLR (al·lel nul, activitat deficient o indeterminada), i va trobar un percentatge més elevat de mutacions nul·lels en individus amb el polimorfisme i el PCVD en comparació amb els pacients sense PCVD. No obstant això, els resultats no són concloents a causa de la mida de la mostra (taula 5 en material suplementari).

Ús de Haploview, vam examinar l’existència de blocs de polimorfismes amb un fort desequilibri de la vinculació. Hem observat només un bloc, format per SNP 6 a 9 segons el mètode de Gabriel (figura), Però cap haplotip associat a la malaltia (taula 4).

Taula 4. Associació d’haplotips amb malaltia cardiovascular prematura, després d’ajustar els factors de risc (n = 339)

p

Freqüència d’haplotips o (95% ci) per al més freqüent
ccca 0.692 (0.727-0.682) 1
TTTG 0.298 (0.306-0.293) 0,84 (0,54-1.31) .44
Associació general per a haplotips .15

95% ci, interval de confiança del 95%; O, ràtio d’probabilitat.
Freqüència d’haplotips al bloc amb un fort vincle format per polimorfismes de nucleòtids individuals de 6 a 9, estimats utilitzant l’algoritme màxim d’expectatives; Freqüència total (malaltia cardiovascular prematura / sense malalties cardiovasculars prematures).

Com es va assenyalar a la secció “Anàlisi estadística”, la mida de la mostra d’estudi inicial només ens va permetre detectar associacions amb un o > 2, amb Potència del 80% per a al·lels de 0,14, com la de SNP3. A causa de la matrícula continuada de nous pacients a la cohort d’estudi, era possible ampliar la mida de la mostra de les persones amb HFH a un total de 133 amb PCVD i 515 sense PCVD (taula 3 en material complementari). Això ens va permetre detectar un estadísticament significatiu o de 1,83 amb un 80% d’energia estadística per a aquesta freqüència al·lel (Quanto v1.2.0).

Els resultats suggereixen que la presència de El T Allele en polimorfisme C.677C > t (RS179986) s’associa amb un major risc de PCVD en HFH.

Anàlisi funcional del polimorfisme C.677C> t (RS179998)

Estudis funcionals van descartar la possibilitat que aquest polimorfisme pugui alterar el patró normal del processament de l’ARNm (vegeu “resul TS “i Fig. 2 en el material complementari).

Discussió

Els estudis previs han citat l’Associació de polimorfismes LRP1 amb malalties arterials coronàries en poblacions caucàsiques, 8, 19, 20 amb malaltia arterial coronària i longevitat, 21 I amb trombosi coronària, 22, 23, encara que altres estudis han presentat resultats contradictoris o menys significatius per a aquesta associació en relació amb la dislipidèmia o la malaltia d’Alzheimer15 i trombosi.24 Aquesta i altra literatura sobre la participació de polimorfismes LRP1 en malalties complexes s’inclouen a les malalties complexes Resum de Gläser et al.16 Recentment, Peters et al., 25 En un estudi exhaustiu dels gens candidats implicats en l’eficàcia de les estatines de reducció del colesterol van trobar que un polimorfisme en intró 2 de LRP1 (RS715948, SNP 2 d’aquest estudi) va ser associats a una reducció de l’infart de miocardi. Tanmateix, aquesta troballa no es va replicar en el nostre estudi de HFH utilitzant un fenotip CVD més ampli que el descrit anteriorment.

Hi ha hagut resultats contradictoris sobre la participació de la C.677C > T polimorfisme amb CVD en poblacions caucàsiques. Pocathikorn et al., 20 En un estudi de 600 individus amb malaltia de l’artèria coronària i 700 controls, van trobar una freqüència significativament més baixa del genotip TT de la C.677C > t polimorfisme en individus amb malalties coronàries del cor en comparació amb els controls. D’altra banda, Benes et al., 21 En un estudi amb 654 individus amb malalties arterials coronàries i 525 controls, van trobar que el T Allele va augmentar el risc de malalties coronàries del cor en temes amb el 5g / 5g Activador Plasminogen Inhibidor-1 genotip .

Tot i que en aquest estudi vam intentar analitzar polimorfismes al llarg del gen, la seva mida d’uns 85 kb significava que requeriríem un nombre més gran de SNP per cobrir la màxima variabilitat de la regió, especialment a l’extrem 5 ‘ Quan l’anàlisi de la regió chr12: 5508548..55893389 amb HAPLOVIEW (HAPMAP3 Navegador del navegador del genoma # 2) va indicar una menor densitat de polimorfismes amb LD (resultats no mostrats).

Limitacions

Entre les limitacions de l’estudi, A més dels derivats de la mida de la mostra i el poder del judici, són els que es deriven del nombre de polimorfismes analitzats i la probabilitat de trobar una associació per casualitat. Per tant, els resultats s’han de confirmar a través de la replicació en altres poblacions abans de passar a buscar altres polimorfismes en LD amb la variant genètica associada a un augment del risc de PCVD.

L’estudi ha calculat els esdeveniments cardiovasculars que es van produir abans de la inclusió a l’estudi que utilitza les directrius basades en l’edat establertes per a PCVD; No obstant això, ja que es tractava d’una cohort retrospectiva, potser hi ha hagut algun biaix de selecció, ja que potser no s’han inclòs alguns casos mortals. Una important limitació del disseny d’estudi és que el fenotip analitzat es va basar en el punt final, és a dir, l’esdeveniment cardiovascular, de manera que no hi havia dades disponibles sobre el grau de malaltia ateroscleròtica abans de l’esdeveniment, com ara el nombre de vaixells afectats; Això requeriria un altre tipus de disseny i anàlisi clínica que no es consideraven en totes les mostres actuals.

Com es descriu a la literatura, 26 l’efecte additiu de diverses variants genètiques pot ajudar a definir millor el risc de Malalties del cor isquèmica i, per extensió, CVD. Per tant, seria interessant analitzar les variants funcionals de LRP1 juntament amb altres gens associats a les malalties i / o implicades en processos similars.

Conclusions

Sembla que el T Allele de la C.677C > t (RS179998) polimorfisme augmenta el risc de PCVD a HFH. A mesura que no s’ha demostrat la funcionalitat del polimorfisme, això probablement es trobarà a LD amb una altra variant genètica que augmenta el risc de CVD.Es necessiten estudis addicionals per replicar els resultats del present estudi en altres poblacions i, a continuació, determinar els polimorfismes que tenen una forta LD amb RS17998 i una associació amb malalties cardiovasculars.

Finançament

Aquest estudi va ser recolzat a Part per finançament des de SAF2010-16549, CNIC-08-2008, i CIBEROBN CB06 / 03.

Conflictes d’interès

Cap declarat.

Agraïments

ho faríem M’agrada reconèixer Nuria Sala, Xavier Muñoz (ICO-IDIBELL) i Mónica Gratacós (CRG) per la seva contribució a la discussió científica del document, Montse Gómez per la seva assistència tècnica i la Fundació per a la hipercolesterolèmia familiar per al seu suport per a l’estudi.

Material suplementari

Material complementari associat amb aquest article es pot trobar, a la versió en línia, a http://dx.doi.org/10.1016/j.rec.2012.03.012.

apèndix A. Dades complementàries

Rebut 6 d’octubre de 2011
acceptat el 7 de març de 2012

Deixa un comentari

L'adreça electrònica no es publicarà. Els camps necessaris estan marcats amb *