Os polimorfismos do xene LRP1 están asociados ao risco prematuro de enfermidades cardiovasculares en pacientes con hipercolesterolemia familiar | Revista Española de Cardioloxía

Introdución

A hipercolesterolemia familiar (FH) caracterízase por altos niveis de colesterol de lipoproteína de baixa densidade no plasma. Leva a depósitos elevados de colesterol no tecido, a aterosclerose acelerada, e un maior risco de enfermidade cardiovascular prematura (PCVD) .1 A anomalía xenética máis común consta de mutacións no xene do receptor de lipoproteína de baixa densidade (LDLR); A frecuencia de poboación de hipercolesterolemia familiar heterocigota (HFH) é de aproximadamente 1/500. Aínda que xeneticamente a enfermidade é causada por mutacións no xene LDLR, o fenotipo clínico de FH pode variar independentemente da mutación e esta variabilidade que se supón que debe ser debido a factores ambientais e xenéticos.2, 3

descubrindo As variacións noutros xenes que poden modificar a susceptibilidade aos eventos cardiovasculares son de gran interese por mor do seu posible uso como predictores da enfermidade. Os xenes implicados na absorción de colesterol e a homeostase son bos candidatos a este tipo de estudo. A lipoproteína de baixa densidade do receptor-related protein-1 (LRP1) é un receptor transmembranar multiligand pertencente á familia LDLR que se conecta lipoproteínas de baixa densidade e facilita a eliminación de unha gran variedade de ligandos implicados na fibrinólise, aterogénese, e thrombogenesis.5 , 6, 7 a sobreexpresión do LRP1 na placa aterosclerótica demostrouse en modelos animais e humanos.8, 9 varios estudos mostraron unha relación entre alteracións na expresión LRP1 e a enfermidade coronaria. 8, 10 a sobreexpresión tamén foi descrita na proteína e ARNm de pacientes con Homozygous FH.11 en xeral, os resultados publicados indican que o LRP1 pode ser un receptor clave na patoxenesia da aterosclerose.

O obxectivo deste estudo foi analizar se hai polimorfismos xenéticos LRP1 que están asociados coa aparición de PCVD en FH.

Métodos de poboación

O estudo inicialmente incluíu 339 casos de pacientes FH heterocigotos non relacionados do estudo de SafeHeart12, 13 (“método s “no material complementario). Os pacientes foron asignados un diagnóstico de enfermidades cardiovasculares (CVD) se houbo unha historia de infarto de miocardio, bypass coronario ou angioplastia, angina pectoris con aterosclerose coronaria diagnosticada angiográficamente (estenosis > 50%), accidente vascular cerebral ou un evento vascular periférico. A enfermidade cardiovascular foi considerada PCVD se o evento ocorreu antes de 55 anos de idade en homes e antes de 65 anos de idade en mulleres. 19 Para cada paciente, os datos foron recollidos en niveis de lípidos de sangue, hipertensión, diabetes mellitus e fumar; Tamén se rexistraron datos antropométricos. As características do estudo poboación móstranse na táboa 1; As mutacións LDLR foron identificadas en todos os pacientes. Detalles das mutacións atopadas e a súa clasificación en función da actividade LDLR residual (nula, deficiente ou indeterminada) pódense atopar en “métodos” e táboa 1 no material complementario.

Táboa 1. Características dos pacientes con estudo Con hipercolesterolemia familiar heterocigota, agrupada por enfermidade cardiovascular prematura

TD

sen PCVD (n = 262) PCVD (N = 77) P Men 111 (42.4) 47 (35.9)
mulleres 151 (57.6) 30 (41.1)
idade, anos 45.2 ± 15.3 53.19 ± 11.3
BMI 26,3 ± 4,8 28.01 ± 5.0 .014
Hipertensión 42 (16.1) 20 (26) .06
fumadores 115 (43.8) 42 (54.5) .067
Diabetes 11 (4) 3 (4) .98
TOTAL CHOLESTEROL, MG / DL 287.1 ± 62.1 281.1 ± 70.2 .512
LDL colesterol, mg / dl 215.3 ± 58.7 209 ± 67.7 .925
HDL colesterol, mg / dl 52.2 ± 13 51.3 ± 17.4 .24
triglicéridos, mg / dl 92.5 (38-320) 94.5 (44-258) .589
Apoa, MG / DL 141.1 ± 35.2 138.8 ± 32.1 .204
APOB, MG / DL 166,4 ± 43.9 159,4 ± 41 .256
Efecto de a mutación na actividade LDLR .527
null alele 161 (61.6) 51 (66.2) Low Activity 75 (28.5) 22 (28.6)
Actividade indeterminada 26 (9.9) 4 (5.2)

Apoa, apolipoproteína a; Apob, apolipoproteína B; BMI, Índice de masa corporal; HDL, lipoproteína de alta densidade; LDL, lipoproteína de baixa densidade; LDLR, receptor de lipoproteína de baixa densidade; PCVD, enfermidades cardiovasculares prematuras.
Os resultados amósanse como media ± desviación estándar, non. (%) ou medianas (gama).
Genotipos de estatística foi definido en P

Genotyping

Primeiro buscamos polimorfismos no PROMOTER LRP1 a través de polimorfismos de conformación única e secuenciación nunha mostra de 86 pacientes con hfh. A continuación analizamos a asociación xenética de 10 polimorfismos con PCVD; O ADN foi extraído do sangue periférico utilizando o kit de purificación do ADN Genómico de Wizard® (Promega).

Proxección de polimorfismos no PROMOTER LRP1

Ver “Métodos” e táboa 2 no material complementario.

Asociación xenotípica estudo

seleccionado 10 LRP1 polimorfismos dun único nucleótido (SNPs) en conxunto co polimorfismo atopar no promotor, en función da súa frecuencia, referencias bibliográficas e funcionalidade (Táboa 2 e Figura 1). os polimorfismos foron genotipados utilizando un TaqMan ® baseado en ensaio de reacción polimerase baseado en polimerasa e discriminación alélica cun aparello de biosystema aplicado 7900.

Táboa 2. Características dos polimorfismos analizados

TD

DBSNP: base de datos de polimorfismo de nucleótidos único; MAF: Frecuencia de alelos menores; ID SNP: identificación de polimorfismo individual de nucleótidos.

Un alelo 1 ocorre con máis frecuencia.
a frecuencia de alelo menores no HAPMAP CEU ou Ceph Panel, atopado na literatura. 8,15,16

Figura 1. Ligazón Análise de desequilibrio entre os polimorfismos de nucleótidos LRP1 analizados. Os bloques de haplotype definidos mediante o método de Gabriel (Haploview 4.0), co disequilibrio de conexión entre pares de marcadores mostrados como R2 (en negro R2 > 0.8). O cadro á dereita do diagrama mostra un bloque con unha forte conexión formada por polimorfismos de nucleótidos individuais de 6 a 9 do estudo.

Análise funcional do C.677C > t polimorfismo (rs1799986)

o efecto funcional do posible polimorfismo no procesamento de mRNA foi analizada por medio de soporte e de bioinformática análise in vitro de minigene. Nesta proba, o exón de interese está clonado entre dous exóns sintéticos para a posterior análise do procesamento de ARN (“Métodos” no material complementario).

Análise estatística

Os datos clínicos foron comparados entre grupos utilizando a proba de estudante T Para variables continuas, χ2 para variables categóricas e probas non paramétricas para variables distribuídas non normalmente (SPSS v.14.0). As frecuencias de alelo foron calculadas a partir dos xenotipos dos suxeitos.Para cada polimorfismo, usamos χ2 para probar se a distribución coñeceu o equilibrio de Hardy-Weinberg e utilizamos a regresión loxística multivariante para analizar a asociación entre os polimorfismos do xene LRP1 e PCVD en HFH, así como para analizar a interacción con covariates.17, 18 Nós calculou o ratio de probabilidade (ou) e 95% de intervalos de confianza (95% de CI) para cada xenotipo en comparación co homocigoto para o alelo máis frecuente ou de referencia, e estimamos a importancia usando un limiar de p

o anterior poder estatístico da mostra (77 casos e 262 controis) foi estimada en 80% a unha prevalencia da enfermidade do 20% e un efecto do polimorfismo no risco dun evento cardiovascular > 2 , e > 1.7 para frecuencias alélicas de 0,14 e 0,30, respectivamente (Quanto V 1.2). Incluímos marcadores con frecuencias de alelos máis baixas por mor da súa funcionalidade (polimorfismo promotor, SNP1 e SNP4 aminoácidos cambian a mutación).

Todas as análises foron axustadas para a idade, o sexo e outros factores de risco CVD no estudo Poboación (Táboa 1). As frecuencias de haplotype foron estimadas por enlaces de disequilibrio (LD) definidos polo método Gabriel e os valores de LD e R2 entre os pares de SNP foron calculados usando Haploview v. 4.2 (Figura 1).

Características do estudo Poboación por Presenza ou ausencia de enfermidades cardiovasculares prematuras

As características da poboación do estudo de acordo coa presenza ou a ausencia de PCVD móstranse na táboa 1. No momento da inscrición no estudo, o 86,5% dos pacientes con HFH recibiron a redución de lípidos terapia. A enfermidade arterial coronaria ou a enfermidade cardíaca isquémica representaron o 93,4% dos acontecementos. Houbo unha maior predisposición a PCVD en homes (p = .004), en pacientes maiores (pp = .01). Non houbo diferenzas significativas na proporción de fumadores en cada grupo no momento da inclusión no estudo.

Observáronse algunhas diferenzas baseadas por sexo (datos non mostrados na táboa 1): BMI foi de 28,4 (6.6) ) En mulleres con PCVD vs 26.7 (5.7) en mulleres sen PCVD (páx .137) e 27.7 (3.7) en homes con PCVD en comparación con 25.9 (3.1) en homes sen PCVD (P = .003). Non houbo diferenzas significativas na frecuencia de hipertensión e fumar entre ambos grupos, aínda que a hipertensión era máis frecuente nas mulleres (40% en PCVD vs 18,2% en non-PPVD, P = .014) que os homes (16,3% VS 13,2%, P = .612) e o tabaquismo era máis frecuente nos homes (82,6% en PCVD vs 58,7% en non-PPVD, P = .005) que as mulleres (16,7% VS 33,7%, P = .085). Aínda que a porcentaxe de individuos con PCVD era maior entre pacientes con HFH e null-alele ou mutacións máis graves en LDLR, as diferenzas non eran significativas nesta mostra.

Proxección de polimorfismos no PROMOTER LRP1

Detectamos a Polimorfismo no promotor (Fig. 1A en material complementario). Segundo a análise silico, este polimorfismo (C.1-25C > g) crea un novo sitio de unión para o factor de transcrición SP1 (Fig. 1B, material complementario).

Asociación de polimorfismos e haplotipos con enfermidades cardiovasculares prematuras en hipercolemia familiar heterocigota

A distribución de xenotipos conformada co equilibrio hardy-weinberg en todos os polimorfismos analizados (P > .2) .. As frecuencias de alelos observadas na poboación non difiren significativamente a partir de datos publicados anteriormente (Táboa 2). Ademais, os marcadores 2, 3, 5 e 6 son etiquetas SNPS de acordo co navegador do xenoma HAPMAP3, lanzamento # 2.

Os resultados da asociación con PCVD despois de axustar a idade, o sexo, o IMC e O efecto da mutación LDLR móstrase na táboa 3. Só SNP3 (RS1799986) mostrou unha asociación significativa con PCVD no modelo dominante (CT + TT VS CC, ou = 1,94; 95% cl, 1.08-3.48; p = .029) .. Obtivemos resultados similares despois de aumentar a mostra a 648 pacientes con HFH (133 con PCVD e 515 sen PCVD) (Táboa 3 en material complementario) e reanalizando os datos (ou = 1,83; 95% CI, 1.16-2.88; P = .011 ).

Táboa 3. Asociación de polimorfismos e enfermidades cardiovasculares prematuras en hipercolesterolemia familiar heterocigota

Polimorfismo analizado variantes xenómicas SNP ID DBSNP Alleles 1 > 2 a Localización xenómica Efecto funcional MAF publicado MAF B MAF neste estudo
1 C.1-25C G RS35282763 C > G promotor Nova secuencia SP1 0.08 0.08 2 IVS2 + 617C > t rs715948 c > t Intron 2 0.32 0.31
3 c.677c > t rs1799986 c > t exon 3 ASP100ASP 0.14-0.15 0.14
4 C.1116C > t rs1800127 c > t exon 6 ALA217VAL 0.03 0.03
5 IVS6 + 245C > g rs7968719 g > c Intron 6 0.49 0.47
6 IVS19 + 144C > t rs1800176 c > T Intron 19 0.30 0.30
7 C.4012C > t rs1800194 c > T Exon 22 CYS1182CYS 0.31 0.30
8 IVS38 + 53C > t rs1800181 c > t Intron 38 0.30 0.30
9 C.10249G > a rs1140648 g > a Exon 61 THR3261TH 0.28 0.30
10 IVS83 + 139A > g rs1800164 g > A INTRON 83 0.28 0.35

TD

TD

TD

TD

snp ID SNP HFH (N = 339) Frecuencias xenotípicas por (95% ci)
1 RS35282763 CC CG gg .9 Non PCVD 0.84 0.15 0.04
PCVD 0.18 0.11 0.01 2 RS715948 CC CT TT .86
NO PCVD 0.5 0.38 0.13
PCVD 0.51 0.39 0.1 3 RS1799986 CC CT tt .029 NO PCVD 0.77 0.2 0.02 1.94 (1.08-3.48)
PCVD 0.64 0.36 0 CT + TT VS CC
3 * RS1799986 CC CT TT .011
NO PCVD 0.76 0.22 0.02 1.83 (1.16-2.88)
PCVD 0.66 0.34 0 CT + TT VS CC
4 RS1800127 CC CT TT NS
NO PCVD 0.95 0.05 0 PCVD 1 0 0 5 RS7968719 CC CG GG .79
sen PCVD 0.29 0.47 0.24
PCVD 0.33 0.39 0.28
6 RS1800176 CC CT TT .096 NO PCVD 0.46 0.45 0.09 PCVD 0.48 0.49 0.03 7 RS1800194 CC CT TT .07
NO PCVD 0.47 0.43 0.1 PCVD 0.48 0.49 0.03 8 RS1800181 CC CT TT .07
Non PCVD 0.47 0.43 0.1
PCVD 0.48 0.49 0.03
9 RS1140648 CC CT TT .075 NO PCVD 0.46 0.45 0.1 PCVD 0.48 0.03 0.03 RS1800164 gg ag aa .72
NO PCVD 0.42 0.45 0.13
PCVD 0.40 0.48 0.12

95% CI, 95% de intervalo de confianza; HFH, heterocigota hipercolemia familiar; ID, identificación; Ns, non significativo; Ou, ratio de probabilidade; PCVD, enfermidade cardiovascular prematura; SNP, polimorfismo de nucleótidos único.
Todos os valores axustados por idade, sexo, índice de masa corporal e tipo de mutación de receptor de lipoproteína de baixa densidade; RS1799986 mostrou un valor P significativo (modelo dominante, xenotipos CT + TT VS CC).

* Resultados despois de aumentar a mostra a 515 temas sen PCVD e 133 con PCVD.

A frecuencia de alelo para o polimorfismo RS1799986 na poboación con HF era similar á da poboación de control español (P = .76) e outras poboacións caucásicas (ver “métodos” e táboa 4 en material complementario).

Analizamos a interacción do polimorfismo RS1799986 co tipo de mutación LDLR (alelo nulo, actividade deficiente ou indeterminada), e atopou unha maior porcentaxe de mutacións de alelos nulas en individuos con polimorfismo e PCVD en comparación cos pacientes sen PCVD. Non obstante, os resultados non son concluíntes debido ao tamaño da mostra (Táboa 5 en material complementario).

Usando HaploView, examinamos a existencia de bloques de polimorfismos cun disequilibrio de conexión forte. Observamos só un Bloque, formado por SNP 6 a 9 segundo o método de Gabriel (Figura), pero ningún haplótipo asociado á enfermidade (Táboa 4).

Table Association 4. dos haplótipos con enfermidade cardiovascular prematura, tras o axuste para factores de risco (n = 339)

frecuencia de haplotypes ou (95% ci) para o máis frecuente p
CCCA 0.692 (0.727-0.682) 1
TTTG 0.298 (0.306-0.293) 0.84 (0.54-1.31) .44
Asociación Xeral de Haplotypes .15

95% CI, intervalo de confianza do 95%; Ou, ratio de probabilidade.
Frecuencia de haplotipos no bloque con unha forte conexión formada por polimorfismos de nucleótidos individuais de 6 a 9, estimada usando o algoritmo de expectación máxima; Frecuencia total (enfermidades cardiovasculares prematuras / sen enfermidade cardiovascular prematura).

Como se indica na sección “Análise Estatística”, o tamaño da mostra de estudo inicial só nos permitiu detectar asociacións con A ou > 2, con O 80% de poder para as frecuencias de alelos de 0,14, como o que ten SNP3. Debido á continua matrícula de novos pacientes á cohorte de estudo, era posible expandir o tamaño da mostra de individuos con HFH a un total de 133 con PCVD e 515 sen PCVD (Táboa 3 en material complementario). Isto permitiunos detectar unha estadística significativa ou de 1,83 cun 80% de poder estatístico para esta frecuencia de alelos (quanto v1.2.0).

Os resultados suxiren que a presenza de O Al Allele en polimorfismo C.677C > t (RS1799986) está asociado a un maior risco de PCVD en HFH.

Análise funcional do polimorfismo C.677C > T (RS179998)

Os estudos funcionais descartaron a posibilidade de que este polimorfismo poida alterar o patrón normal do procesamento de ARNm (ver “Resul TS “e Fig. 2 No material complementario).

Discusión

Os estudos previos citaron a asociación de polimorfismos LRP1 con enfermidade arterial coronaria nas poboacións caucásicas, de 8, 19, 20 con enfermidade arterial coronaria e lonxevidade, 21 e con trombosis coronaria, 22, 23 aínda que outros estudos presentaron resultados contraditorios ou menos significativos para tal asociación en relación coa dislipidemia ou a enfermidade de Alzheimer15 e trombosis.24 Esta e outra literatura sobre a implicación dos polimorfismos LRP1 en enfermidades complexas está incluída no Resumo de Gläser et al.16 Recientemente, Peters et al., 25 Nun estudo integral dos xenes candidatos implicados na eficacia das estatinas de baixada de colesterol descubriron que un polimorfismo no intrón 2 do LRP1 (RS715948, SNP 2 deste estudo) foi asociado a unha redución do infarto de miocardio. Non obstante, este descubrimento non foi replicado no noso estudo de HFH usando un fenotipo de CVD máis amplo que o descrito anteriormente.

Houbo resultados en conflito sobre a implicación do C.677C > polimorfismo con CVD en poboacións caucásicas. Pocathikorn et al., 20 Nun estudo de 600 individuos con enfermidade arterial coronaria e 700 controis, atopou unha frecuencia significativamente menor do genotipo de TT do polimorfismo de C.677C >en individuos con enfermidade cardíaca coronaria en comparación cos controis. Doutra banda, Benes et al., 21 Nun estudo con 654 individuos con enfermidade arterial coronaria e 525 controis, descubriron que o alelo T aumentou o risco de enfermidades cardíacas coronarias en materias co xenotipo do activador de plasminógeno de 5G / 5G .

Aínda que neste estudo intentamos analizar polimorfismos en todo o xene, o seu tamaño de aproximadamente 85kb significaba que requiriríamos un maior número de SNPs para cubrir a máxima variabilidade na rexión, especialmente no extremo 5 ‘, Onde a análise da rexión CHR12: 5508548..55893389 con haploview (HAPMAP3 Relación do navegador do xenoma # 2) indicou unha menor densidade de polimorfismos con LD (resultados non mostrados).

Limitacións

Entre as limitacións do estudo, Ademais dos derivados do tamaño da mostra e do poder do xuízo, son os derivados do número de polimorfismos analizados e a probabilidade de atopar unha asociación por casualidade. Por conseguinte, os resultados deben ser confirmados a través da replicación noutras poboacións antes de pasar a buscar outros polimorfismos en LD coa variante xenética asociada ao aumento do risco de PCVD.

O estudo calculou eventos cardiovasculares que ocorreron antes da inclusión en O estudo utilizando pautas baseadas en idade establecidas para PCVD; Non obstante, dado que esta era unha cohorte retrospectiva, pode haber algún sesgo de selección, xa que algúns casos mortos poden non ser incluídos. Unha limitación importante do deseño do estudo é que o fenotipo analizado estaba baseado no punto final, é dicir, o evento cardiovascular, polo que non estaban dispoñibles datos sobre o grao de enfermidade aterosclerótica antes do evento, como o número de buques afectados; Isto requiriría outro tipo de deseño e análise clínica que non foron considerados en todas as mostras actuais.

Como se describe na literatura, 26 O efecto aditivo de varias variantes xenéticas pode axudar a definir mellor o risco de enfermidade cardíaca isquémica e, por extensión, CVD. Polo tanto, sería interesante analizar as variantes funcionais da LRP1 xunto con outros xenes asociados con enfermidades e / ou implicadas en procesos similares.

Conclusións

Parece que o TLELE T do C.677C > t (RS179998) Polimorfismo aumenta o risco de PCVD en HFH. A medida que a funcionalidade do polimorfismo non foi demostrada, isto presumiblemente será atopado en LD con outra variante xenética que aumenta o risco de CVD.Necesítanse novos estudos para replicar os resultados do presente estudo noutras poboacións e despois determinar o polimorfismo que ten un forte LD con RS179998 e unha asociación con enfermidade cardiovascular.

Financiamento

Este estudo foi apoiado en parte mediante o financiamento de SAF2010-16549, CNIC-08-2008 e Ciberobn CB06 / 03.

Conflitos de interese

Ningún declarado.

Recoñecementos

Queremos quere recoñecer Nuria Sala, Xavier Muñoz ( ICO – IDIBELL ) e Mónica Gratacós ( CRG ) pola súa contribución á discusión científica do papel, Montse Gómez polo seu asistencia técnica e da Fundación para a hipercolesterolemia familiar, polo seu apoio ao estudo.

Pódese atopar material complementario

Material complementario asociado a este artigo, na versión en liña, en http://dx.doi.org/10.1016/j.rec.2012.03.012.

Apéndice A. Datos complementarios

Recibido o 6 de outubro de 2011
Aceptado 7 de marzo de 2012

Deixa unha resposta

O teu enderezo electrónico non se publicará Os campos obrigatorios están marcados con *