Les polymorphismes de gène LRP1 sont associés à un risque prématuré de maladie cardiovasculaire chez les patients atteints d’hypercholestérolémie familiale | Revista Española de Cardiología

Introduction

L’hypercholestérolémie familiale (FH) est caractérisée par des niveaux élevés de cholestérol lipoprotéine à faible densité dans le plasma. Il conduit à des dépôts de cholestérol élevés dans les tissus, accéléré de l’athérosclérose et un risque accru de maladie cardiovasculaire prématurée (PCVD) .1 L’anomalie génétique la plus courante consiste en des mutations dans le gène de récepteur de lipoprotéines à faible densité (LDLR); La fréquence de population de l’hypercholestérolémie familiale hétérozygote (HFH) est d’environ 1/500. Bien que génétiquement, la maladie soit causée par des mutations du gène LDLR, le phénotype clinique de FH peut varier quelles que soient la mutation et cette variabilité est supposée être due à la fois aux facteurs environnementaux et génétiques.2, 3

découverte Les variations d’autres gènes susceptibles de modifier la susceptibilité aux événements cardiovasculaires revêtent un grand intérêt en raison de leur utilisation éventuelle en tant que prédicteurs de la maladie.4 Les gènes impliqués dans l’absorption de cholestérol et l’homéostasie sont de bons candidats à ce type d’étude. La protéine de récepteur de la lipoprotéine à faible densité (LRP1) est un récepteur de transmbrane multiligique appartenant à la famille LDLR qui lie des lipoprotéines à faible densité et facilite l’élimination d’une grande variété de ligands impliqués dans la fibrinolyse, l’athérenèse et la thrombogenèse.5 6, 7 surexpression du LRP1 dans la plaque d’athérosclérose a été démontrée dans des modèles d’animaux et des humains.8, 9 Plusieurs études ont montré une relation entre les altérations de l’expression de LRP1 et une maladie coronarienne cardiaque.8, 10 surexpression a également été décrite dans la protéine et ARNm de patients atteints d’homozygote FH.11 dans l’ensemble, les résultats publiés indiquent que LRP1 peut être un récepteur clé de la pathogenèse de l’athérosclérose.

Le but de cette étude était d’analyser s’il existe des polymorphismes de gène LRP1 qui sont associés Avec la survenue de PCVD dans FH.

Méthodes Population

L’étude a initialement inclus 339 cas de patients atteints de FH hétérozygotes non liés de l’étude SafeHeart12, 13 (« Méthode s « dans le matériel supplémentaire). Les patients ont été attribués à un diagnostic de maladie cardiovasculaire (CVD) s’il y avait des antécédents d’infarctus du myocarde, de pontage coronarien ou d’angioplastie, angine pectoris avec l’athérosclérose coronaire diagnostiquée angiographique (sténose > 50%), accident vasculaire cérébral ou un événement vasculaire périphérique. La maladie cardiovasculaire a été considérée comme PCVD si l’événement s’est produit avant 55 ans chez les hommes et avant 65 ans chez les femmes.14 Pour chaque patient, des données ont été collectées sur des niveaux de lipides sanguins, de l’hypertension, du diabète sucré et du tabagisme; Les données anthropométriques ont également été enregistrées. Les caractéristiques de la population d’étude sont présentées dans le tableau 1; Les mutations de LDLR ont été identifiées chez tous les patients. Les détails des mutations trouvées et leur classification basée sur une activité de LDLR résiduelle (null, déficiente ou indéterminée) peuvent être trouvés dans « Méthodes » et tableau 1 dans le matériau supplémentaire.

Tableau 1. Caractéristiques des patients de l’étude Avec une hypercholestérolémoque familiale hétérozygote, regroupée par une maladie cardiovasculaire prématurée

pas de PCVD (n = 262) PCVD (n = 77) p
hommes 111 (42.4) 47 (35.9) .004
femmes 151 (57.6) 30 (41.1)
Âge, années 45,2 ± 15,3 53,19 ± 11.3
bmi 26.3 ± 4.8 28.01 ± 5.0 .014
hypertension 42 (16.1) 20 (26) .06
fumeurs 115 (43.8) 42 (54.5) 0,067
Diabète 11 (4) 3 (4) .98
Cholestérol total, mg / dl 287.1 ± 62.1 281.1 ± 70.2 .512
Ldl cholestérol, mg / dl 215.3 ± 58.7 209 ± 67,7 .925
HDL cholestérol, mg / dl 52,2 ± 13 51,3 ± 17,4 .24
triglycérides, MG / DL 92.5 (38-320) 94.5 (44-258) .589
apoa, mg / dl 141,1 ± 35.2 138.8 ± 32.1 .204
Apob, mg / dl 166.4 ± 43.9 159,4 ± 41 .256
de la mutation sur l’activité LDLR .527
null allèle 161 (61.6) 51 (66.2)
faible activité 75 (28.5) 22 (28.6)
Activité indéterminée 26 (9.9) 4 (5.2)

apoa, apolipoprotéine A; Apob, apolipoprotéine b; IMC, indice de masse corporelle; HDL, lipoprotéine haute densité; Ldl, lipoprotéine basse densité; LDLR, récepteur de lipoprotéines à faible densité; PCVD, maladie cardiovasculaire prématurée. Les résultats sont indiqués comme moyen ± écart type, no. (%) ou des médianes (gamme).
une signification statistique a été définie sur p

Génotypage

Nous avons d’abord recherché des polymorphismes dans le promoteur LRP1 à travers des polymorphismes de conformation à un écho et un séquençage dans un échantillon de 86 patients atteints de hfh. Nous avons ensuite analysé l’association génétique de 10 polymorphismes avec PCVD; L’ADN a été extrait du sang périphérique à l’aide du kit de purification de l’ADN génomique Wizard® (promega).

Projection des polymorphismes dans le promoteur LRP1

voir « Méthodes » et Tableau 2 dans le matériau supplémentaire.

Association génotypique. Etude

Nous avons sélectionné 10 polymorphismes de nucléotides simples de LRP1 (SNP) avec le polymorphisme trouvé dans le promoteur, sur la base de leurs fréquences, de leurs références bibliographiques et de leurs fonctionnalités (tableau 2 et figure 1). Les polymorphismes ont été génotypés à l’aide d’un taqman ® dosage de la réaction de la chaîne de la chaîne polymérase basé sur la polymérase et discrimination allélique avec un appareil de biosystème appliqué 7900.

Tableau 2. Caractéristiques des polymorphismes analysés

Polymorphisme analysé Variantes génomiques ID SNP DBSNP Allèles 1 > 2 A Localisation génomique Effet fonctionnel Publié maf B MAF dans cette étude
1 c.1-25c g rs35282763 C > g promoteur Nouvelle séquence SP1 0,08 0.08
2 ivs2 + 617c > T RS715948 C > T INTRON 2 0,32 0.31
3 C.677C > T RS1799986 C > T EXON 3 asp100asp 0.14-0.15 0,14
4 c.1116c > T RS1800127 C > T Exon 6 ALA217VAL 0.03 0.03
5 ivs6 + 245c > G RS7968719 G > C INTRON 6 0,49 0,47
6 ivs19 + 144c > T rs1800176 C > T INTRON 19 0,30 0,30
7 c.4012c > t rs1800194 c > T EXON 22 CYS1182CYS 0.31 0,30
8 ivs38 + 53c > t rs1800181 C > T INTRON 38 0,30 0,30
9 c.10249g > a rs140648 g > A EXON 61 THR3261STHTHTHTR 0,28 0,30
10 ivs83 + 139a > g rs1800164 g > A INTRON 83 0,28 0.35

DBSNP: base de données de polymorphisme de nucléotides unique; MAF: Fréquence d’allèle mineure; Identifiant SNP: Identification du polymorphisme de nucléotides unique.

Un allèle 1 se produit le plus souvent. B Fréquence d’allèle mineure dans le CEU HAPMAP ou CEPH, trouvé dans la littérature. 8,15,16

Figure 1. Analyse de déséquilibre de liaison entre les polymorphismes analysés de nucléotides simples LRP1 analysés. Blocs haplotypes définis à l’aide de la méthode de Gabriel (HAPLOVIVIEW 4.0), avec le déséquilibre de liaison entre paires de marqueurs indiqués comme R2 (en noir R2 > 0,8). Le cadre à droite du diagramme montre un bloc avec une liaison solide formée par des polymorphismes de nucléotides simples 6 à 9 de l’étude.

Analyse fonctionnelle du C.677C > T Le polymorphisme (RS1799986)

L’effet fonctionnel possible du polymorphisme sur le traitement de l’ARNm a été analysé à l’aide d’une analyse bioinformatique et d’une analyse de minigène in vitro. Dans ce test, l’exon d’intérêt est cloné entre deux exons synthétiques pour une analyse ultérieure du traitement de l’ARN (« méthodes » dans le matériau supplémentaire).

Analyse statistique

Les données cliniques ont été comparées entre les groupes utilisant le test de l’étudiant T Pour les variables continues, 2 pour variables catégoriques et tests non paramétriques pour variables non normalement distribuées (SPSS V.14.0). Les fréquences allèles ont été calculées à partir des génotypes des sujets.Pour chaque polymorphisme, nous avons utilisé 2 pour tester si la distribution a rencontré l’équilibre Hardy-Weinberg et nous avons utilisé une régression logistique multivariée pour analyser l’association entre les polymorphismes Gene LRP1 et le PCVD dans HFH, ainsi que pour analyser l’interaction avec des covariats.17, 18 calculé le ratio de cotes (ou) et 95% d’intervalles de confiance (95% CI) pour chaque génotype par rapport à l’homozygote pour l’allèle le plus fréquent ou l’allèle de référence, et nous avons une importance estimée à l’aide d’un seuil de p

antérieur La puissance statistique de l’échantillon (77 cas et 262 contrôles) a été estimée à 80% pour une prévalence de la maladie de 20% et un effet du polymorphisme sur le risque d’un événement cardiovasculaire > 2 et > 1.7 pour les fréquences alléliques de 0,14 et 0,30, respectivement (Quanto V 1.2). Nous avons inclus des marqueurs avec des fréquences d’allèle inférieure en raison de leur fonctionnalité (polymorphisme promotrice, SNP1 et la mutation du changement d’acide aminé SNP4).

Toutes les analyses ont été ajustées pour l’âge, le sexe et d’autres facteurs de risque de CVD dans l’étude population (tableau 1). Les fréquences d’haplotype ont été estimées par des blocs de déséquilibre de liaison (LD) définis par la méthode GABRIEL et les valeurs de LD et R2 entre les paires SNP ont été calculées à l’aide de HAPLOView c. 4.2 (Figure 1).

Résultats Caractéristiques de la population de l’étude par Présence ou absence de maladie cardiovasculaire prématurée

Les caractéristiques de la population d’étude en fonction de la présence ou de l’absence de PCVD sont présentées dans le tableau 1. Au moment de l’inscription à l’étude, 86,5% des patients atteints de HFH recevaient des lipides thérapie. La maladie coronarienne des artères ou des maladies cardiaques ischémiques représentaient 93,4% des événements. Il y avait une prédisposition plus élevée au PCVD chez les hommes (p = .004), chez les patients âgés (pp = 0,01). Il n’y avait pas de différences significatives dans la proportion de fumeurs dans chaque groupe au moment de l’inclusion dans l’étude.

Certaines différences fondées sur le sexe ont été observées (données non présentées dans le tableau 1): BMI était 28,4 (6.6 ) chez les femmes avec la PCVD VS 26.7 (5.7) chez les femmes sans PCVD (p = 0,137) et 27,7 (3.7) chez les hommes avec PCVD par rapport à 25,9 (3.1) chez les hommes sans PCVD (p = .003). Il n’y avait pas de différences significatives de la fréquence de l’hypertension et du tabagisme entre les deux groupes, bien que l’hypertension était plus répandue chez les femmes (40% dans PCVD VS 18,2% dans les non-PCVD, p = 0,014) que les hommes (16,3% contre 13,2%, P = 0,612) et fumer était plus répandu chez les hommes (82,6% dans PCVD VS 58,7% dans Non-PCVD, P = 0,005) que les femmes (16,7% contre 33,7%, p = 0,085). Tandis que le pourcentage d’individus avec PCVD était plus élevé chez les patients atteints de HFH et de NULL-allele ou de mutations plus graves dans la LDLR, les différences n’étaient pas significatives dans cet échantillon.

Le dépistage des polymorphismes dans le promoteur LRP1

Nous avons détecté un polymorphisme dans le promoteur (Fig. 1a dans du matériel supplémentaire). Selon l’analyse de silico, ce polymorphisme (C.1-25C > g) crée un nouveau site de liaison pour le facteur de transcription SP1 (Fig. 1b, matériau supplémentaire).

Association des polymorphismes et des haplotypes avec une maladie cardiovasculaire prématurée de l’hypercholestérolémie familiale hétérozygote

La distribution de génotypes conforme à l’équilibre Hardy-Weinberg dans tous les polymorphismes analysés (P > .2) . Les fréquences allèles observées dans la population ne diffèrent pas de manière significative des données publiées précédemment (tableau 2). De plus, les marqueurs 2, 3, 5 et 6 sont des SNP étiquettes selon le navigateur de génome HAPMAP3, la libération n ° 2.

Les résultats de l’association avec PCVD après avoir ajusté pour l’âge, le sexe, l’IMC et L’effet de la mutation LDLR est présenté dans le tableau 3. Seul SNP3 (RS1799986) a montré une association significative avec PCVD dans le modèle dominant (CT + TT VS CC, ou = 1,94; 95% CL, 1.08-3,48; p = 0,029) . Nous avons obtenu des résultats similaires après avoir augmenté l’échantillon à 648 patients HFH (133 avec PCVD et 515 sans PCVD) (tableau 3 dans le matériau supplémentaire) et réanalyser les données (ou = 1,83; 95% CI, 1,16-2,88; p = 011 ).

Tableau 3. Association de polymorphismes et maladie cardiovasculaire prématurée en hypercholestérolémie familiale hétérozygote


SNP ID SNP hfh (n = 339) fréquences génotypiques por (95% CI)
1 rs35282763 cc cg gg .9
pas de PCVD 0,84 0,15 0.04
PCVD 0,88 0,11 0,01
2 RS715948 CC CT TT .86
pas de PCVD 0.5 0,38 0,13
PCVD 0.51 0.39 0.1
3 rs1799986 cc ct TT .029
pas de PCVD 0,77 0.2 0.02 1.94 (1.08-3.48)
PCVD 0,64 0,36 0 ct + tt vs cc
3 * RS1799986 CC CT TT .011
pas de PCVD 0,76 0,22 0.02 1.83 (1.16-2.88)
PCVD 0.66 0,34 0 ct + tt vs cc
4 RS1800127 CC CT TT NS
n ° PCVD 0,95 0,05 0
PCVD 1 0 0
5 rs 7968719 cc cg gg .79
pas de PCVD 0,29 0,47 0,24
pcvd 0,33 0,39 0,28
6 RS1800176 CC CT TT .096
pas de PCVD 0,46 0,45 0.09
PCVD 0.48 0.49 0.03
7 RS1800194 cc ct tt 0,07
n ° PCVD 0,47 0,43 0,1
pcvd 0,48 0,49 0.03
8 rs1800181 cc ct tt .07
non PCVD 0,47 0,43 0,1
PCVD 0.48 0.49 0,03
9 RS1140648 CC CT TT .075
pas de pcvd 0,46 0,45 0.1
PCVD 0,48 0,49 0,03
10 RS1800164 gg AG aa .72
n ° PCVD 0,42 0,45 0,13
PCVD 0,40 0,48 0,12

95% CI, intervalle de confiance de 95%; HHH, hypercholestérolémoque familiale hétérozygote; ID, identification; Ns, pas significatif; Ou, ratio de cotes; PCVD, maladie cardiovasculaire prématurée; SNP, polymorphisme simple nucléotidique.
Toutes les valeurs ajustées pour l’âge, le sexe, l’indice de masse corporelle et le type de mutation des récepteurs de lipoprotéines à faible densité; RS1799986 a montré une valeur P significative (modèle dominant, génotypes CT + TT vs cc).

* Résultats après avoir augmenté l’échantillon à 515 sujets sans PCVD et 133 avec PCVD.

La fréquence allèle du polymorphisme de RS1799986 dans la population avec HF était similaire à celle de la population de contrôle espagnole (p = 0,76) et d’autres populations caucasiennes (voir « Méthodes » et tableau 4 dans le matériel supplémentaire).

Nous avons analysé l’interaction du polymorphisme RS1799986 avec le type de mutation LDLR (allèle nulle, activité déficiente ou indéterminé) et a trouvé un pourcentage plus élevé de mutations NULL-allele chez les personnes avec le polymorphisme et le PCVD par rapport aux patients sans PCVD. Cependant, les résultats ne sont pas concluants en raison de la taille de l’échantillon (Tableau 5 dans le matériau supplémentaire).

Utilisation de HAPLOVIVIEW, nous avons examiné l’existence de blocs de polymorphismes avec un déséquilibre de liaison solide. Nous avons observé un seul bloc, formé par SNP 6 à 9 selon la méthode de Gabriel (Figure), mais aucun haplotype associé à la maladie (tableau 4).

Tableau 4. Association des haplotypes avec une maladie cardiovasculaire prématurée, après ajustement des facteurs de risque (n = 339)

95% CI, intervalle de confiance de 95%; Ou, ratio de cotes.
Fréquence des haplotypes dans le bloc avec une liaison solide formée par des polymorphismes de nucléotides simples 6 à 9, estimé à l’aide de l’algorithme d’attente maximum; Fréquence totale (maladie cardiovasculaire prématurée / aucune maladie cardiovasculaire prématurée).

Comme indiqué dans la section « Analyse statistique », la taille de l’échantillon initial de l’étude ne nous a permis de détecter les associations avec un ou > 2, avec 80% de puissance pour les fréquences allèles de 0,14, telles que celle avec SNP3. En raison de la poursuite de l’inscription de nouveaux patients dans la cohorte de l’étude, il était possible d’élargir la taille de l’échantillon des personnes atteintes de HFH à un total de 133 avec PCVD et 515 sans PCVD (tableau 3 dans un matériau supplémentaire). Cela nous a permis de détecter une valeur statistiquement significative ou de 1,83 avec une puissance statistique à 80% pour cette fréquence allèle (Quanto V1.2.0).

Les résultats suggèrent que la présence de L’allèle T dans le polymorphisme C.677C > T (RS1799986) est associé à un risque accru de PCVD dans HFH.

Analyse fonctionnelle du polymorphisme C.677C > T (RS179998)

Des études fonctionnelles ont exclu la possibilité que ce polymorphisme puisse modifier le schéma normal de traitement de l’ARNm (voir « Resul TS « et la Fig. 2 dans le matériau supplémentaire).

Discussion

Les études précédentes ont cité l’association des polymorphismes de LRP1 avec une maladie coronarienne dans des populations de race blanche, 8, 19, 20 avec une maladie coronarienne et la longévité, 21 et avec une thrombose coronaire, 22, 23 Bien que d’autres études ont présenté des résultats contradictoires ou moins importants pour une telle association en ce qui concerne la dyslipidémie ou la maladie d’Alzheimer15 et la thrombose.24 Cette littérature et une autre littérature sur l’implication des polymorphismes de LRP1 dans des maladies complexes est inclus dans la Résumé de GLÄSER ET al.16 Récemment, Peters et al., 25 Dans une étude approfondie des gènes candidats impliqués dans l’efficacité des statines d’abaissement du cholestérol ont constaté qu’un polymorphisme dans Intron 2 de LRP1 (RS715948, SNP 2 de cette étude) était associé à une réduction de l’infarctus du myocarde. Cependant, cette découverte n’a pas été reproduite dans notre étude de HFH à l’aide d’un phénotype de CVD plus large que celui décrit ci-dessus.

Il y a eu des résultats contradictoires concernant l’implication du C.677C > T polymorphisme avec CVD dans des populations caucasiennes. Pocathikorn et al., 20 Dans une étude de 600 personnes atteintes d’une maladie coronarienne de l’artère et de 700 commandes, ont trouvé une fréquence significativement inférieure du génotype TT de la C.677C > t polymorphisme chez les individus avec une maladie coronarienne cardiaque par rapport aux contrôles. D’autre part, Benes et al., 21 Dans une étude de 654 personnes atteintes d’une maladie coronarienne de l’artère et de 525 commandes, ont constaté que l’allèle T a augmenté le risque de maladie coronarienne dans des sujets avec l’inhibiteur de l’activateur de 5g / 5g de plasminogen. Génotype .

Bien que dans cette étude, nous avons tenté d’analyser les polymorphismes dans tout le gène, sa taille d’environ 85 kb signifiait que nous aurions besoin d’un plus grand nombre de SNP pour couvrir une variabilité maximale dans la région, en particulier à l’extrême 5 ‘extrême, Lorsque l’analyse de la région CHR12: 55085489..55893389 avec HAPLOVIVIEZ (la libération n ° 2 du navigateur de génome de HAPMAP3) a indiqué une densité plus faible de polymorphismes avec LD (résultats non représentés).

Limitations

Parmi les limitations de l’étude, En plus de ceux dérivés de la taille et de la puissance de l’échantillon, sont ceux qui découlent du nombre de polymorphismes analysés et la probabilité de trouver une association par hasard. Les résultats doivent donc être confirmés par la réplication dans d’autres populations avant de passer à la recherche d’autres polymorphismes dans la LD avec la variante génétique associée à un risque accru de PCVD.

Les événements cardiovasculaires calculés de l’étude survenus avant l’inclusion dans l’étude utilisant des directives à base d’âge établie pour PCVD; Cependant, étant donné qu’il s’agissait d’une cohorte rétrospective, il peut y avoir eu quelques biais de sélection, car certains cas mortels n’auraient peut-être pas été inclus. Une limitation importante de la conception de l’étude est que le phénotype analysé était basé sur le point final, c’est-à-dire l’événement cardiovasculaire, aucune donnée n’est disponible sur le degré de maladie athéroscléreuse avant l’événement, tel que le nombre de navires touchés; Cela nécessiterait un autre type de conception et d’analyse clinique qui n’étaient pas pris en compte dans tous les échantillons actuels.

comme décrit dans la littérature, 26 L’effet additif de plusieurs variantes génétiques peut aider à mieux définir le risque de maladie cardiaque ischémique et, par extension, CVD. Il serait donc intéressant d’analyser les variantes fonctionnelles de LRP1 ainsi que d’autres gènes associés à une maladie et / ou impliqués dans des processus similaires.

Conclusions

Il apparaît que l’allèle T de la C.677C > T (RS179998) Le polymorphisme augmente le risque de PCVD dans HFH. Comme la fonctionnalité du polymorphisme n’a pas été démontrée, celle-ci sera probablement trouvée dans la LD avec une autre variante génétique qui augmente le risque de CVD.Des études supplémentaires sont nécessaires pour reproduire les résultats de la présente étude dans d’autres populations, puis déterminer le (s) polymorphisme (s) ayant une LD forte avec RS179998 et une association avec une maladie cardiovasculaire.

Financement

Cette étude a été prise en charge dans partie par financement de SAF2010-16549, CNIC-08-2008 et Ciberobn CB06 / 03.

Conflits d’intérêts

Aucune déclarée.

Remerciements

Nous le ferions Aime reconnaître Nuria Sala, Xavier Muñoz (ICO-IDIBELL) et Mónica Gratacós (CRG) pour leur contribution à la discussion scientifique sur le document, Montse Gómez pour son assistance technique et la fondation d’hypercholestérolémie familiale pour leur soutien à l’étude.

Matériel supplémentaire

Matériau supplémentaire associé à cet article peut être trouvé dans la version en ligne, dans http://dx.doi.org/10.1016/j.rec.2012.03.012.

Annexe A. Données complémentaires

Reçu le 6 octobre 2011
Accepté 7 mars 2012


fréquence des haplotypes ou (95% CI) pour le plus fréquent p
ccca 0,692 (0.727-0.682) 1
TTTG 0.298 (0.306-0.293) 0,84 (0.54-1.31) .44
Association générale des haplotypes .15

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